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粪便钙卫蛋白检测试剂盒操作步骤
2017-02-04 浏览次数：6278
一.样本采集和储存
1、采便盒采集新鲜粪便样本。固体约20g或稀便约20ml（约粪便盒的三分之一）
2、5天内4℃保存，5天至1月内-20℃保存，1月以上-70℃长时间保存
二.钙卫蛋白试剂盒提取程序
1、定量管螺纹一端插入粪便，使螺纹填满，插入定量管中并拧紧，确保螺纹被填满，（约13mg粪便）
2、若样本为水样，直接用移液枪吸取13ul（13mg）到定量管，若样本为粘稠的胶状便，建议采用电子天平称量定量
3、拧开定量管另一端，加入650ul样本提取液（1:50倍稀释），涡旋震荡5-10min，直到螺纹上粪便样本*溶解
4、将震荡好的萃取液从滤头处挤出上清，滴入1.5ml EP管内，取10ul加入到1500ul孵育缓冲液（150倍稀释）
三.钙卫蛋白试剂盒ELISA步骤
1、将试剂盒平衡至室温
2、将96孔板清洗2遍，甩干（注意：洗后不能放置时间过长；可不用洗板操作）
3、分别吸取100ul稀释后的样本、标准品及质控品
4、用封膜封板，置于水平摇床，18-28°C 孵育30-60分钟，400转/分钟
5、清洗4遍
6、每孔均加入100ul酶结合物
7、用封膜封板，置于水平摇床上，18-28°C 孵育30-60分钟，400转/分钟
8、清洗5遍，甩干
9、每孔均加入100ul TMB底物液
10、用封膜封板，置于水平摇床上，避光，18-28°C，孵育15分钟，400转/分钟
11、每孔均加入100ul终止液终止
12、用酶标仪在450 nm处读数（5分钟内）
13、x轴使用浓度值30,90,300,900,1800ug/g，Y轴使用OD值，使用四参数拟合标曲。根据Y值计算获得样本X值
如需具体操作说明书，请。
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