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很实用的Western Blot实验流程
2017-02-04 浏览次数：2846
什么是WB?
Western Blot中文名称“蛋白免疫印迹”，是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相载体上，而后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。
一.实验流程：
样本制备 ---SDS-PAGE电泳---转膜---封闭---抗体孵育---显色
二.标本类型：
1.细胞培养上清（胞外）
2.细胞和组织裂解物
三.组织样本处理方法：
1．采集标本后，称取组织净重，用液氮迅速冷冻保存备用；
2．标本融化后置冰上，加5倍体积冷PBS（可参考文献加适量蛋白酶抑制剂），低温匀浆研磨处理；
3．4℃ 6000rpm离心15min，收集上清（注意去掉上层油脂），分装后一份待检测，其余冷冻备用；
4. 蛋白定量。
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