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怎么选择流式抗体？
2018-05-03 浏览次数：1941
我们开始流式实验时，首先要选择抗体，必然要涉及到荧光的选择，尽量使这些荧光的补偿值降到zui低。
1，我们需要了解我们用的流式细胞仪的硬件设施（激光，滤光片）
2，选择合适的荧光染料，尽量利用到你的仪器上的所有激光，这样可以使这些荧光交叉可能性达到zui小。一般四种颜色或以下的比较好选，常用：FITC,PE,APC,Percp-cy5.5。界面有点不同，但基本原理就是设置好你需要集中颜色，用的是哪台仪器，几根激光。。。软件就会自动列出合适的染料。
3，选择好荧光染料以后，就是将这些染料与你的抗体起来，这就要根据自己实验的需要了，有些常用的抗体上可能标记有很多种染料，但有些不常用的选择性就不太多，所以可以先定一些无法选择的抗体，然后就是根据表达量少的标记荧光信号强的染料，认为重要的抗体标记荧光信号强的，常用荧光的强弱如下：PE>APC>PE-CY7>Percy-cy5.5>FITC>APC-CY7。
4，抗体确定好后，就可以开始预实验了：包括样品的处理，抗体的浓度，时间，这些都需要一定的try。
5，正式开始实验需要做blank/isotype,单染（两两调补偿），复染（sample）。
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