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ELISA试剂盒实验操作注意事项

2019-11-03 浏览次数：2243

一、实验前将所有试剂平衡至室温，包括样本、TMB（非常重要）。

二、强烈建议老师在操作的时候每个样本包括标准品做复孔（请务必这样操作），因为这样可以：

• 求平均值，确保实验结果的准确性

• 对试剂盒的性能进行评估

• 对自己的操作进行评估

• 解决跳孔

三、为保证老师 ELISA 实验结果准确，其中几点重要的操作注意事项请务必参考：

如果以下表述与说明书中不一致，请按照实验对应说明书的要求操作。

1、标准品溶解：标准品溶解严格按照说明书进行操作，建议老师进行标准品稀释时，在EP管中进行。

2、孵育：说明书中进行孵育的时候，一定要用微孔板振荡器振荡，这个很重要，利于抗原抗体充分结合。

3、洗板：建议按照说明书操作，每次洗涤至少洗液浸泡30s，重复6次，洗板时间太短、次数太少会导致实验效果不佳，延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。

4、如何控制标曲显色？(仅针对双抗夹心法ELISA试剂盒)

5 - 30分钟显色时间为经验范围，每个具体的实验，可根据以下情况，确定大致的显色时间：

1) 肉眼观察：标曲S5孔有淡蓝色、Blank孔无明显蓝色时，即可终止。

2) 仪器判断：630 nm左右波长下，标曲S1孔的OD值达到0.5 - 0.7、S5孔的OD值达到0.05 - 0.08、Blank孔的OD值小于0.05时，即可终止。

3) 高敏系列试剂盒因灵敏度更高，需严格控制显色时长，可较普通试剂盒适当缩短显色时间。

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