C4d对肾移植慢性排斥中的临床研究有很大的帮助

【摘要】 研究背景:同种异体肾移植自1954年获得成功后,不论临床实践和基础研究工作均取得巨大进展。对于移植肾慢性排斥的发病机制目前尚不十分清楚,现在多数学者认为是免疫性和非免疫性的机理共同作用的结果。Theruvath等在临床研究中对移植肾慢性排斥的诊断基于以下四个方面:①血肌酐进行性升高超过12个月;②组织光镜检查见有典型的病理学特征:移植性动脉病及移植性肾小球病;③免疫组化检查见C4d在管周毛细血管(peritubular capillaries,PTC)沉积;④在移植肾活检时,病人血循环中可检出新产生的供体特异性抗体(donorspecific antibody,DSA)。根据移植排斥体液免疫理论,抗体会引起同种移植排斥。相关报道显示,(1)抗体引起肾移植的超急排斥;(2)导致与早期肾移植失败相关的C4d在肾小球沉积;(3)抗体是早期急性肾移植排斥的良好指标;(4)在826名发生肾移植排斥的患者中有96%的人群出现抗体;(5)33次不同的研究表明,抗体与肾移植,心脏移植,肺移植及肝移植的慢性排斥相关;(6)3个报告证实肺移植患者血液循环中的HLA抗体出现在细支气管炎性闭塞之前,以及HLA抗体出现在肾移植排斥前。此外,24个中心对1,629名患者的前瞻性联合研究显示,通过6个月的随访,发现抗体能够预测移植术后的移植失败(P=0.05)。同时发现,移植排斥患者血清中的HLA抗体的特异性并非都与供者抗原的特异性相同。此现象很可能因为特异性抗体已经被经历排斥的移植器官所吸附。内皮组织表达的抗HLAⅠ类、Ⅱ类或其他抗原的自身抗体对移植肾有多种影响,包括急性和慢性排斥反应。认识这些特征并采取恰当的治疗需要活检检测C4d染色阳性及检测到循环抗体。实际上有经验的病理学家在回顾移植肾内皮组织C4d染色上就能够区分临床意义与病理学机制的不同作用。在新近出现的慢性体液性排斥何种治疗方法*,尚须进一步临床实验证实。目的:通过肾移植术后慢性排斥(chronic rejection,CR)患者移植肾组织C4d的检测,探讨肾小管管周毛细血管C4d沉积的临床意义。

对象与方法:1、对象肾移植术后慢性排斥反应患者活检标本40例,男性21例,女性19例,年龄23～62岁,平均38.5±7.6岁。2、方法2.1 C4d的检测取慢性排斥反应患者移植肾活检标本,用免疫组化方法测定C4d。以C4d在一半以上管周毛细血管基膜呈明亮的线性沉积判断为阳性。2.2 PRA的检测取患者全血5ml,应用酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定群体反应性抗体(panel reaction antibody,PRA),用电脑软件分析打印结果。2.3实验分组:(1)C4d阳性组:C4d在一半以上管周毛细血管基膜呈明亮的线性沉积判断为阳性。(2)C4d阴性组:管周毛细血管无C4d沉积,但肾小球系膜区、基底膜、肾小管基膜上可见C4d沉积。3、统计学方法:采用SPSS11.5统计软件,实验数据均以均数±标准差表示,计量资料的样本比较用独立样本t检验,计数资料用x~2检验,P≤0.05为差异有统计学意义。

结果:1、以C4d在一半以上毛细血管基膜呈明亮的线性沉积判断为阳性。40例中,管周毛细血管(PTC)C4d沉积13例(32.5%),阴性组管周毛细血管无C4d沉积,但肾小球系膜区、基底膜、肾小管基膜上可见C4d沉积;PRA阳性19例(47.5%)。2、其中C4d阳性组PRA阳性者10例(76.9%),阴性者3例(23.1%),C4d阴性组PRA阳性者9例(33.3%),阴性者18例(66.7%)。C4d阳性组和阴性组中术后PRA比较,差异有统计学意义(P＜0.05)。3、在性别上,C4d阳性组中男性6例,女性7例,C4d阴性组中男性15例,女性12例,两组在性别比较上无显著性差异(P＞0.05);在年龄上,C4d阳性组年龄为38.2±12.7岁,C4d阴性组年龄为39.2±11.1,两组在年龄比较上无显著性差异(P＞0.05);在女性妊娠*,C4d阳性组中有6/7(85.7%)有过单胎或多胎妊娠史,C4d阴性组中有8/12(66.7%)有过妊娠史,两组在妊娠*比较有显著性差异(P＜0.05);在移植次数上,C4d阳性组二次移植4例、三次移植1例,C4d阴性组二次移植1例,两组在移植次数比较上有显著性差异(P＜0.05);在热缺血时间上,C4d阳性组6.45±2.43分钟,C4d阴性组6.26±1.55分钟,两组在热缺血时间比较上无显著性差异(P＞0.05);在冷缺血时间上,C4d阳性组10.19±2.20小时,C4d阴性组9.71±1.78小时,两组在冷缺血时间比较上无显著性差异(P＞0.05);在肾移植术后抗排斥方案上,采用环孢素(CsA)/他克莫司(FK506)、霉酚酸酯(MMF)、激素(强的松)三联抗排斥治疗,C4d阳性组环孢素9例、他克莫司4例,C4d阴性组环孢素15例、他克莫司12例,两组在抗排斥方案比较上无显著性差异(P＞0.05);在术后血清肌酐上,C4d阳性组507.5±142.7umol/l,C4d阴性组415.0±128.7umol/l,两组在术后血清肌酐比较上有显著性差异(P＞0.05)。结论:1、移植肾组织PTC部位C4d的沉积同受者血清PRA存在正关联性,术后PRA阳性患者移植肾C4d沉积阳性率明显高于阴性组。2、慢性排斥患者PRA水平显著升高,表明移植肾功能减退有体液免疫因素参与。3、本实验表明,C4d为判断肾移植术后慢性体液性排斥一个有意义指标,在一些早期爬行肌酐患者,尽早行移植肾活检检测C4d,早期采取相应治疗措施,可能能够预防慢性体液性排斥的发生和发展。