我公司1，25双羟基维生素D试剂盒优势

我公司新品1，25双羟基维生素D试剂盒操作简单方便，不需氮吹仪，现货供应，下面是介绍：

1、 1，25双羟基维生素D试剂盒预期用途
运用酶联免疫法体外定量检测血清中的1,25-二羟基维生素D的浓度。

2、 1，25双羟基维生素D试剂盒基本信息

3、 1，25双羟基维生素D试剂盒临床背景
A． 1，25双羟基维生素D试剂盒生物活性
维生素D主要由皮肤中的7-脱氢胆固醇合成，部分来源于饮食和补充剂。在肝脏中，维生素D的25位碳原子羟基化生成25-羟基维生素D。25-羟基维生素D进一步在肾脏和其它组织代谢，羟基化生成有活性的维生素D，1,25-二羟基维生素D，作用于肠、肾脏、骨骼和其它组织器官。孕妇胎盘和结节病的巨噬细胞也产生1,25-二羟基维生素D。

1,25-二羟基维生素D是维生素D的活性形式，而25-羟基维生素D和维生素D本身是无活性的。1,25-二羟基维生素D促进肠道对钙、磷的吸收，促进骨的吸收和矿化，从而防止佝偻病和软骨病。1，25-二羟基维生素D存在于负责其转运的组织（胎盘、肾脏、乳腺…）和内分泌腺，如甲状旁腺。1,25-二羟基维生素D代谢快，在血中的半衰期大约12h，主要代谢产物是维生素D3-23羧酸，一个C-23的羧酸衍生物，没有生物活性。另一条途径，1,25-二羟基维生素D经过24位-羟基化生成活性较低的1,24,25-三羟基维生素D，是一次要途径。

1,25-二羟基维生素D在血清或血浆中的浓度比25-羟基维生素D低100到1000倍。由于浓度低及存在很多类似物，测定1,25-二羟基维生素D需要层析柱提取和分离。

B．1，25双羟基维生素D试剂盒临床应用
1,25-二羟基维生素D水平失常，影响钙的代谢，如：磷代谢、类肉状瘤病，肾衰竭、甲旁亢和甲旁低、肿瘤引起的高钙血症、高钙尿、维生素耐受功能障碍，抗惊厥药物治疗。

4、1，25双羟基维生素D试剂盒检测原理
样本和质控品需要经过混合溶剂的提取和层析柱的分离，使1,25-二羟基维生素D和其它维生素D代谢物分开，校准品不需要经过层析柱分离。之后，将校准品、纯化的样本和质控品直接加入包被1,25-二羟基维生素D的微孔板中孵育。

操作步骤 Ⅰ. 提取步骤：！只用于质控品和样本 1. 试管(12 x 75 mm)编号：2个质控品和zui多40个样本。 2. 每个试管中加入0.5 mL质控品或样本。 3. 每个试管中加入2 mL提取溶剂。 4. 盖上试管盖，1200 rpm振荡1h。 5. 室温下离心5min（800g）。 6. 上清液用于下一步分离。

Ⅱ. 分离步骤：！只用于质控品和样本。 1. 玻璃管(16 x 100 mm)或(12 x 120 mm)，或塑料管(falcon 2097)编号，用于层析：2个质控品和zui多40个样本。 2.每个管中放一个二氧化硅层析柱。 3.从层析柱上端加入1.6mL提取上清液（2 x 0.8mL），在重力作用下慢慢滴下。 4.1mL洗涤液洗层析柱参见试剂制备 ！注意：每个层析柱上不能出现真空，因为需要重力作用。 5.从层析柱上端加入500μL二氯甲烷，在重力作用下慢慢滴下。 6.从层析柱上端加入500μL蒸馏水，室温离心5min（800g）。 7.试管(12 x 75 mm)编号，用于洗脱1,25-二羟基维生素D。离心后，将层析柱中的物质转移到相应的玻璃试管中。8.从每个层析柱上端加入300μL 洗脱液用来洗脱1,25-二羟基维生素D，然后室温下离心5min（800g）。 9.混匀洗脱馏分。 注意：此步之后，样本必须立即加入微孔板中孵育，防止样本降解。 Ⅲ. 孵育 1.选择所需数量的微孔进行试验。未使用的微孔应放回有干燥剂的包装袋中封好，储存在于2-8℃。 2.将微孔安装到固定架上。 3.用旋涡混合器混匀校准品、提取的质控品和样本。 4.加入150uL孵育缓冲液到所有的微孔中。 5.加入50uL的校准品（未提取），洗脱的质控品和样本到对应的微孔中。 6.用封板膜封闭或盖上微孔板，2-8℃下孵育18±2h。 一夜孵育后，洗板前60min+/-15min准备辣根过氧化物酶结合物工作液. 7.从每个微孔中吸出液体。 洗板3次： — 加入洗涤液0.35mL到每个微孔中 — 吸出各微孔中的溶液 8.加入200uL的辣根过氧化物酶结合物工作液到微孔板的每个微孔中。 9.用封板膜封闭或盖上微孔板，4℃下孵育 1h。
10.从每个微孔中吸出液体。 洗板3次： — 加入洗涤液0.35mL到每个微孔中 — 吸出各微孔中的溶液 11.洗板后15分钟内，吸取200uL显色溶液加入到每个微孔中。 12.室温下，孵育15分钟，避免阳光直射。 13.在各微孔中加入100uL终止液。 14.在1小时内，读取450 nm下的吸光度值（参考波长630nm或650nm）。