一.巨细胞病毒试剂盒的组成

1．抗原包被的微孔板：96孔，1块

2．酶联试剂：12mL，1瓶，(红色液体)

3．样品稀释液：22mL，1瓶，(绿色液体)

4．阴性校正液：0IU/mL l50μL，1瓶(无色盖)

5．临界校正液：1.2IU/mL 150μL，l瓶(黄色盖)

   CMV IgG指数=1.0

6．阳性校正液：6IU/mL，150μL，1瓶，(红色盖)

7．阳性校正液：18IU/mL，150μL，1瓶，(绿色盖)

8．阴性对照：范围见瓶签，150μL/瓶(蓝色盖)

9．阳性对照：范围见瓶签，150μL/瓶，(紫色盖)

10．洗涤浓缩液(20X)：50mL，1瓶

11．TMB试剂(一步)： 11mL，1瓶

12．终止液(1N  HCL)：11mL，1瓶

二.巨细胞病毒试剂盒的保存和仪器

1．试剂盒在2—8℃下保存。

2．微孔板保存在有干燥剂的密封袋中。

3．试剂盒在有效期内是稳定的。

4．试剂盒中的试剂在保存或使用期间，应避免暴露在热、阳光和强烈光线之中。

三、巨细胞病毒试剂盒样品的采集和制备

1．采集血样并分离血清。

2．采集的样品在2-8℃下可保存7天。冰冻状态下可保存6个月。血清样品要避免反复冻融。

四、巨细胞病毒试剂盒稀释的试剂的准备

1．制备好稀释的洗涤缓冲液：按1：19的比例稀释洗涤浓缩液(20X)，即50mL洗涤浓缩液(20X)用蒸馏水或去离子水稀释至1升。已稀释好的洗涤液在2-8℃下可保存一个月，用前混均。

2．使全部样品和试剂达到室温(18-25℃，下同)。

五、巨细胞病毒试剂盒检测步骤

1．从酶标板上拆下所需数量的板条，再固定在支架上。建议：待测样品、阴性对照、阳性对照和临界校正液按双份设置。

2．按1：40稀释待测样品、阴性对照、阳性对照临界校正液。方法是将5μL上述样品分别加入到200μL样品稀释液中，充分混匀。

3．取100μL稀释的血清样品、临界校正液和对照品加入到相应的微孔中。并取100μL样品稀释液加入到lA位置的微孔内，作为空白对照，轻敲微孔板，去除液体中的气泡。37℃下温育30分钟。

4．温育完毕，把全部微孔中的液体清除干净后，用稀释的洗涤缓冲液(1X)冲洗5次。

5．向每个微孔中加入100μL酶联试剂，轻轻混合10秒钟，37℃温育30分钟。

6．甩干微孔中的酶联试剂，用稀释的洗涤缓冲液(1X)冲洗5次。

7．向每个微孔中加入100μLTMB试剂，轻轻混合10秒钟。37℃温育15分钟。

注意：如无酶标仪，可在第七步加入TMB试剂，37℃温育15分钟后，观察颜色变化，对比患者

样品的显色与临界校正液的显色深浅进行判断。

8．向上述微孔中加入100μL终止液(1N HCL)终止反应。轻轻混合30秒钟。此步对确保全部蓝色*转变为黄色十分重要。

9．用酶标仪在450nm处于15分钟内读出每个微孔中液体的O.D.值。