1、实验原理

SRANKL试剂盒是一种酶联放大的两步夹心法免疫检测试剂盒。在此实验中，标准品、质控品和未知样品在包被了抗IGFBP-3单克隆抗体的微孔板中温育。温育之后洗板，再加入辣根过氧酶标记的抗IGFBP-3抗体。第二次温育后再洗板，再向微孔中加入TMB底物液。之后再加入酸性终止液，用双波长450nm和620nm检测底物的酶反应程度。

检测到的OD值直接与样品中IGFBP-3的浓度成正比。实验使用了一套IGFB-3标准品，用标准的OD值对IGFBP-3的浓度可做出一条标准曲线，之后质控品和未知样品中的IGFBP-3浓度就可以从此标准曲线上定量得到。

2.成分

胰岛素样生长因子结合蛋白-3试剂盒为96孔检测提供了足够的试剂成份。每个试剂盒包括如下试剂成份：

注意：使用稀释缓冲液作为零标准品

标准品的校准是使用NIBSC/WHO 重溶的IGFBP-3，参考试剂编号93/560。

3.没有提供的材料

1 好质量的蒸馏水

2 移液器 50ul、100ul、1ml（使用一次性吸嘴）

3 塑料管，用于样本稀释

4 混合器

5 电磁搅拌器

6 洗板机

7 450nm酶标仪，参考波长650nm。

4.准备

标准品：

使用1ml的蒸馏水重溶标准品。使用稀释缓冲液作为零标准品。

质控品：

使用1ml的蒸馏水重溶质控品。

酶联物：

制备适当体积酶联物溶液，例如：100ul的20倍浓缩的酶联物加至2ml的酶联物缓冲液中。使用混合器混匀，建议临时制备。

洗涤液：

制备适当体积的即用型洗涤液，通过加入199份的蒸馏水至1份的200倍浓缩的洗涤液，使用一个电磁搅拌器混匀。

5.样本的制备

血清必须保存在2-8℃

如果实验没有在24小时内进行，建议分装保存在-20℃，避免反复冻融。使用前，所有的样本应该平衡至室温。建议使用前混匀样本。

不能使用溶血的样本。

6.SRANKL试剂盒实验步骤：

1. 在塑料试管中标记好每个样本

2. 每管加入1ml的稀释缓冲液

3. 将10ul的样本加入试管中

4. 混匀样本，重溶好标准品和质控品

5. 每次实验选择好所需要的板条。不使用的板条应重新与干燥剂一起于密封袋中，保存在2-8℃。

6. 将板条固定于板架上

7. 移取100ul 的稀释缓冲液当零标准品

8. 
   

 加入100ul的标准品、质控品、稀释的样本至相应的孔中

1. 每孔加入50ul的酶联物溶液

2. 在室温下温育2小时

3. 倒出孔中溶液

4. 洗板3次

5. 在洗板后的15分钟内，每孔加入100ul的显色剂

6. 于室温下温育30分钟

7. 每孔加入100ul的终止液

8. 在1小时内450nm酶标仪下读数（参考波长为630nm或者650nm）。

7.应用范围

该试剂盒为酶联免疫试验检测人血清中的胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）。